复习资料：2019年1月自考《生物制药技术》重点串讲八

61．固定化细胞及其特点：
（1）固定化细胞定义：被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞，与固定化酶一起统称为固定化生物催化剂；细胞固定化技术是酶固定化的延伸，因之固定化细胞可称为第二代固定化酶。如今，该技术已扩展至动植物细胞，甚至线粒全、叶绿体及微粒体等细胞器的固定化。故细胞固定化技术应用较固定化酶更为普遍。其在医药、食品、化工、医疗诊断、农业、分析、环保及能源开发以及理论研究中的应用已取了举世瞩目的成就；QQ：806235356
（2）固定化细胞特点：生物细胞虽属固相催化剂，但因其颗粒小难于截留或定位，亦需固定化；固定化细胞既具有细胞特性，也有生物催化剂功能，又具有固相催化剂特点，其优点在于：①无需进行酶的分离纯化，减少起始投资；②细胞保持原初生命活动状态，固定化过程酶回收率高；③细胞内酶较固定化酶稳定性更高；④细胞内辅因子可以自动更生；⑤细胞本身含有酶体系，可催化一系列反应；⑥抗污染能力强；
由于固定化细胞除具有固定化酶特点外，尚有其自身优点，故其应用更为普遍，其对传统发酵工艺的技术改造具有极重要影响，有可能逐渐取代传统发酵工艺目前，工业上已应用的固定化细胞有多种，如固定化E,coli生产L-天冬氨酸或6-APA、固定化黄色短杆菌生产L-苹果本能、固定化链霉菌生产异构糖及固定化假单胞菌生产L-丙氨酸等。
62．终止酶反应的方法：（1）反应时间一到，立即取出反应液，置于沸水中，加热使酶失知；（2）立即加入适宜的酶变性剂，使酶变性失活；3）加入酸或碱溶液，使反应液的pH值迅速远离酶催化应的最适pH值；（4）将取出的反应液立即置于冰，或冰盐溶液中，使反应液的温度迅速低至10⁰C以下。
63．酶与一般催化剂相比，所具有的优点：（1）催化效率高；（2）专一性强；（3）反应条件温和；（4）酶的活性是受调节控制的。
64．自分泌效应：
细胞在合成和分泌细胞因子的同时，自身细胞也表达相应的受体与自身分泌的细胞因子结合，引起更强的细胞因子的效应。
65．细胞因子发生作用的过程：（1）细胞因子作用于有特定受体的靶细胞；（2）与受体结合后，通过受体将信息传递至胞核；（3）多种基因表达增强或抑制；（4）导致细胞形成特定的蛋白质，使细胞功能发生变化。
66．细胞因子的四大系别：（1）干扰素；（2）白细胞介素；（3）肿瘤坏死因子；（4）集落刺激因子。
67．IL-4的生物学活性：（1）激发B淋巴细胞；（2）对T细胞的促进作用；（3）诱导胞腺细胞增生，也可诱发巨噬细胞体积增大，移动力增强。
68．IL-4的生物学活性：（1）作用于免疫系统；（2）作用于造血系统；（3）调节多种急性时相蛋白；（4）作用于神经系统。
69．IL-9的功能的主要表现：（1）促进T细胞增殖；（2）促红细胞前体早期发育；（3）促肥大细胞生知和分泌IL-6。
70．TNF与一般化疗药品相比，其不同点是：（1）在体外TNF对肿瘤细胞效应是非常特特异的；（2）TNF有广泛的生物学活性，是内毒素休克的主要介质。
71．干扰素的主要作用：（1）使机体的细胞建立抗病毒状态；（2）免疫调节；（3）细胞生长和分化的调控。
72．人类国种CST：（1）粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）；（2）粒细胞集落刺激因子（G-CSF）；（3）巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）；（4）多能集落刺激因子（multi-CSF）。
73．集落刺激因子的生物学作用：（1）促进造血、使周围血白细胞升高，可促使幼稚细胞加快成熟及刺激造血干细胞、祖细胞的增殖与分化；（2）促进粒细胞溶酶体酶的合成，释放增强，促进过氧化物酶合增强；（3）可促使白血病细胞分化及抑制白血病细胞生长。
74．集落刺激因子的临床应用：（1）治疗血细胞减少症；（2）治疗再生障碍性贫血、骨髓发育不良和自体骨髓移植后的恢复；（3）治疗癌症；（4）治疗AIDS。
75．细胞因子受体的信息传递途径：（1）通过受体本身的酷氨酸激传递递信息；（2）通过第三成分传递信息。
76．用于制备细胞因子的培养细胞标准十分严格，对这些细胞的要求包括：（1）细胞来源要清楚；（2）细胞建株的鉴定资料要记录清楚；（3）了解细胞系的生长特性和在培养条件下的细胞的稳定性；（4）培养细胞时所用的血清不含细菌、病菌、真菌和支原体。
77．干扰素的基本特性：（1）种属特异性；（2）作用广谱性和选择性；（3）相对无害性；（4）特殊稳定性。
78．真核基因在原核细胞中获得表达必须具备的三个条件：（1）要有原核细胞的启动子；（2）要有能与原核细胞16SrRNA3’端相配合的顺序；（3）表达的干扰素多肽要不被细胞酶类所迅速降解。
79．IL-2的生物学作用：（1）促T细胞增殖；（2）对自然杀伤细胞（NK）的作用；（3）诱导细胞毒性T淋巴细胞产生和增殖；（4）诱导淋巴因子活化淋巴细胞产生；（5）促B细胞增殖分化作用；（6）IL-2与其他白介素协同作用。
80．集落刺激因子的功能：（1）刺激造血细胞增殖；（2）维持细胞存活；（3）分化定型；（4）刺激终末细胞的功能活性。
81．三种检测重组基因工程CSF的方法（1）生物学检测法；（2）分子生物学检测法；（3）免疫学检测法。
82．TNF抗肿瘤作用的可能机制：（1）细胞的直接细胞毒及细胞生长抑制作用；（2）肿瘤内血管阴塞引起肿瘤缺血性坏死；（3）TNF的免疫调节作用可能在其抗瘤效应中起一定的作用。QQ：806235356
83．细胞因子共有特性：（1）多源性；（2）多效性；（3）高效性；（4）快速反应性；（5）理化性质：①化学本质为大分子多肽或蛋白；②多为单链分子；③多具有“分泌型激素”的特性；④基因多由数个外显子和内含子组成；⑤基因均为单拷贝；⑥分子量均小于80KD。
84．细胞因子的受体，根据其结构特点和功能分类：（1）细胞因子受体的新家族；（2）肿瘤坏死因子受体家族；（3）免疫球蛋白超级家族受体；
85．基因工程细胞因子制备的基本步骤：1）制备含特异性细胞因子基因的cDNA文库；（2）从cDNA文库中筛选目cDNA克隆；（3）构建表达性载体，制备高级表达性工程菌（细胞）。
86．干扰素的生物功能本质：（1）抗细胞内侵害；①抑制病毒繁殖；②抑制胞内的其它微生物繁殖；（2）抗细胞分裂活性；（3）调节免疫功能活性；①调节免疫监视功能；②调节免疫自稳功能；
87．基因工程干扰素的制备方法：（1）干扰素工程菌的组建；①分离提取干扰素基因；②制备人工重组质粒；③转化宿主菌；（2）基因工程干扰素的制备；（3）基因工程干扰素的质量控制；
88．集落刺激因子的检测方法：（1）生物活性检测法；①骨髓细胞集落形成法；②依赖细胞株；（2）分子生物学检测法；斑点杂交法；（3）免疫学检测技术；双抗体夹心ELISA法。
89．CSFs制检的一般步骤：（1）制备工程菌（或细胞）；2）工程菌（或细菌）的培养；（3）分离纯化；①工程菌的破碎，沉淀；②离心；③层析：离子交换层析、亲和层析；④超滤浓缩，分子筛层析；（4）除菌过滤，分装，冻干；（5）半成品检定，主要包括下列检定项目：①蛋白含量测定②活性测定③比活性测定；④分子量测定；⑤纯度测定；⑥核酸含量测定；⑦鼠lgG含量测定；⑧等电测定；⑨无菌试验；⑩热原质等检定项目；（6）成品检定：①外观检查；②活性测定；③水分测定；④无菌试验；⑤安全毒性试验；⑥热原质试验；⑦肽图测定等检测等检测项目；（7）分包装；（8）贮存。
90．红细胞生成素的测定方法：（1）生物体内测定法；（2）生物体外测定法；（3）放射免疫测定法。

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