复习资料：2019年1月自考《生物制药技术》重点串讲三

第四章  细胞工程
1．植物细胞工程包括植物细胞及其原生质体的培养，植物原生质体融合，细胞大规模培养及次生代谢物的生产。
2．植物培养细胞无锚地依赖性及接触抑制性。
3．植物细胞生长的最适pH通常为5.8～6.0。
4．植物细胞实验室培养法是悬浮、微室、平板、看护、悬滴及单花粉等多种培养方式。
5．悬浮培养特点是培养过程中，细胞总数不断增加，一定时间后产量达最高点，生长趋于停止。
6．植物细胞接种浓度通常为2.5×10⁴～5.0×10⁴细胞/毫升。
7．植物细胞单细胞培养技术有平板培养法，微室培养法、看护培养法等。
8．微室培养法的优点是可直接观察分裂繁殖及分化全过程，胞质环流规律及线粒体生长与分裂活动，亦可进行连续观察原生质体融合，细胞壁再生及融合后细胞分裂活动，同时可进行显微摄像。
9．看护培养法培养时间较微室培养长。
10．细胞突变的主要原因是染色体缺失、重复、倒位、异位、碱基顺序转换、颠换及移码所引起。
11．植物细胞培养物易发生自发突变，其突变频率在10^-7～10^-6之间。
12．人工诱发植物细胞突变的化学因素主要有碱基类似物、烷化剂、抗生素等。
13．筛选植物突变细胞的目的在于获得某些药物高产细胞株或某些物质转化的高产酶细胞株。
14．筛选细胞突变体主要依据细胞表型变化。
15．自离体植物细胞培养物中筛选细胞突变体的方法有直接选择法，间接选择法及绿岛法。
16．植物细胞培养物处于无组织无器官分化的分散状态时许多重要基因并不表达。
17．目前已建立植物细胞种质保存法有：干燥保存法，液体石蜡覆盖法，低温保存法，低压低氧保存法及超低温深冻保存法。
18．超低温深冻保存法系将植物种质于-196⁰C的液氮中保存。
19．常用的冻冻保护剂有DMSO，甘油，PEG，葡萄糖、山梨糖及蔗糖。
20．为提高存活力，冻存材料应选用抗寒力强的幼龄培养细胞。
21．对于种子、花粉、球茎等高度脱水材料可以采用快速降温的冻存。
22．对于不耐寒植物细胞需采用慢速冰冻法。
23．对于木本植物冬芽冻存物需于0⁰C慢速化冻。
24．深冻细胞活力及存活率测定的方法有再培养法、二醋酸荧光素染色法及氯化三笨四氮唑还原法。
25．再培养法是检查细胞活力的根本方法。
26．植物原生质体制备的材料应用较多的是叶片，愈伤组织及悬浮培养细胞。
27．高等植物细胞壁主要成分为纤维素，其次为半纤维素，果胶质及蛋白质。
28．植物原生质体制备时的脱壁酶有纤维素酶，果胶酶，斗纤维素酶，蜗牛酶及崩溃酶。
29．纤维素酶使用时的pH值为5.4。
30．果胶酶最适pH值为5.8。
31．纤维素酶及果胶酶混合使用的pH值为5.4～5.6之间。
32．脱壁酶液采用0.45μm微孔滤膜过滤除菌。
33．纯化植物原生质体的方法有离心法、飘浮法、界面法及滴洗法。
34．植物原生质体活力测定方法有：根据形态特征判断其活力，活体染色法及光染料活体染色法。
35．大多数植物原生质培养1～3day，即再生新细胞壁。
36．大多数植物原生质体通常在1～2周内发生第一次分裂。
37．诱导生根的培养基含有低浓度生长素，而不含有分裂素。
38．植物细胞融合实质是其原生质体融合。
39．PEG诱导植物细胞融合时，关键是PEG作用时间。
40．PEG诱导植物细胞融时，PEG规格和纯度影响结果。
41．植物细胞大规模培养的目的在于通过规模培养，获得细胞，初级及次级代谢产物，为药品、食品及化工行为提供服务。
42．植物细胞大规模培养设备有浆式搅拌罐，多孔板式搅拌罐、卡普兰式螺旋浆搅拌罐及空气提升式培养罐。
43．动物细胞工程的内容十分广泛，包括人工受精、胚胎移植、体外受精、性别选择、细胞融合等。
44．原代动物培养细胞一般繁殖50代即退化死亡。
45．动物细胞所需营养要求高，其碳源不可为无机物。
46．开发动物细胞无血清培养基，将促进动物细胞工程的发展。
47．动物细胞培养基是培养动物器官，组织及细胞的营养液体，只有维持液及生长液之分。
48．动物细胞培养基的维持液含低浓度或不含小牛血清，生长液含4%～20%的小牛血清。
49．以组织块为材料的培养方法叫组织块培养法。
50．细胞培养包括细胞及细胞团块单层培养及单细胞克隆培养。
51．细胞培养又分初代培养，二倍体细胞培养及确立细胞株培养。
52．人皮肤细胞分散较难，适宜于用组织块培养法培养。
53．人皮肤细胞分散较难，适宜于组织块培养法培养。
54．组织块培养法又分为血浆凝固培养法，胶原固着培养法及无基质固着培养法。
55．动物细胞培养条件一般为37℃，5％CO₂。
56．小牛血清可以保护动物细胞免受胰酶的消化。
57．动物细胞培养时通入CO₂以维持培养基的pH值。
58．正常组织原代单层细胞不能无限期繁殖。
59．微量板细胞克隆法是分离混杂细胞的优良方法。
60．微量板细胞克隆法是可以用于建立纯细胞系，检查细胞遗性的一致性，分离细胞变种，评价药物及毒物对细胞生长的影响，筛选淋巴细胞杂交瘤及基因工程细胞，制备单克隆抗体并用于病毒学研究。
61．二倍体细胞培养寿命是用群体倍数（PD）表示，如二倍体细胞培养后，其总数增加一倍时，即称为1个PD。
62．影响二倍体细胞培养的因素主要是分种率，继代寿命及pH值等。
63．二倍体细胞保留着原位组织正常的细胞性状，并已用于生产疫苗，尿激酶及干扰素等药物，也用于细胞遗传学，细胞分化及衰老研究，以及药物毒性和环境污染物的检测。
64．传代细胞不具有锚地依赖性，接角抑制性及群体效应酬，丧失了组织分化组力及脏器物异性，仅具有种属特异性。
65．动物细胞种质保存的形式有组织性，细胞悬浮物及细胞单层培养物等。
66．动物细胞种质保存方法有常温，低温及超低温冰冻法3种。
67．超低温法是保存种质细胞最有效和最重要的方法。
68．甘油使用浓度一般为5％-20％。
69．DMSO使用浓度一般为5％-12.5％。
70．目前改变膜蛋白分布状态及膜脂质分子重新排布的因素有病毒，PEG，电场力及离心力。
71．在一定条件下，通过电脉冲作用使细胞融合的过程谓之电场诱导融合作用。
72．完整细胞间融合是扩大生物变异的有效手段。
73．两种完整细胞融合时，所转移的遗传物质有整套染色体组，核外DNA及胞质因子等。
74．完整细胞间的融合是扩大生物变异的有效手段。
75．在细胞融合时，完整细胞一方相当于一个微型反应器。
76．影响动物细胞融合的因素有促融剂、细胞性质、温度、pH值，离子强度及离子种类。
77．两种亲本细胞融合混合物至少含有双核或多核异型融合子，双核或多核同型亲本融合子及亲本五种类型细胞。
78．筛选的目的是获得性能优良的杂种细胞。
79．杂种动物细胞筛选系统及方法有HAT选择系统，抗药性筛选系统，互补选择法，原位杂交法及基因探针选择法。
80．HAT是含有效黄嘌呤、氨基喋呤及胞腺嘧啶核苷的一种选择性培养基。
81．HPRT即次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶。
82．控制杂种细胞遗传表现型的作用机制从表现上可分为互补作用，激活作用，消失作用及激活与消失作用。
83．杂种细有生物学特性实质上是通过基因重组与表达调控实现的。
84．免疫反应是机体对自己和异已物质的种种识别反应。
85．免疫反应分体液免疫与细胞免疫。
86．B淋巴细胞与体液免疫有关。
87．T淋巴细胞主要与细胞免疫有关。
88．骨髓瘤细胞应选择不分泌瘤蛋白，体外能无限繁殖和连续移植继代培养者，且为HPRT-或TK-的亲本。
90．单克隆抗体生产分法分体外法及体内法两种。
91．大规模培养技术系指人工条件下高度大量培养有用动物细胞生产珍贵药品的技术。
92．无血清培养基的优点是：可用于培养不同种类的细胞及含血清培基中不能生长细胞，可用于杂种细胞，基因工程细胞及突变体细胞培养，生产有用物质。
93．细胞悬浮培养法适用于培养确立细胞株、杂交瘤细胞、肿瘤细胞、血液细胞及淋巴细胞。
94．细胞固定化方法有吸附和包埋法。
95．微载体培养优点在于兼有固定化培养与悬浮培养的双重特点。
95．动物细胞生长缓慢，又具有锚地依赖依。
96．组织纤维溶酶原激活剂是一川丝氨酸蛋白酶。
97．抗乙型肝炎表现抗原单克隆抗体是专一性识别HbsAg的单一抗体。
98．体外法生产单克隆抗体是使杂交瘤细胞在人工反应器内大规模培养并表达相应抗体。
99．体内法生产克隆抗体是利用生物体为细胞反应器大规模培养杂交瘤细胞生产抗体的方法。
100．检出分泌特异抗体细胞后，应即时进行克隆化筛选与鉴定，以免非必需细胞过分生长

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